口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體 檢測試劑盒使用說明書
【產(chǎn)品簡介】
口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus, FMDV） 非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測試劑盒適用于檢測豬、牛、羊的血 清，可以區(qū)分免疫動物和野毒感染動物。
本試劑盒采用阻斷 ELISA 法，在酶標(biāo)板條微孔上 預(yù)包被口蹄疫病毒 3ABC 抗原。在試驗中，加入稀釋后 的待檢血清，經(jīng)過溫育后，若樣品中含有口蹄疫病毒抗 原特異性抗體，則與包被板上的抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去 未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)的單抗，樣本 中的抗體阻斷了單抗與包被板上抗原的結(jié)合；經(jīng)洗滌除 去未結(jié)合的酶結(jié)合物；在微孔中加入 TMB 底物液，經(jīng) 酶催化產(chǎn)生的藍(lán)色信號與樣本中的抗體含量成反比，加 入終止液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀 450nm 波長測定反應(yīng) 孔中的吸光度 OD 值。
【組份】
1抗原預(yù)包被板條1/2 塊6終止液15ml
2酶結(jié)合物11/22ml7陰性對照2ml
310 倍濃縮洗滌液100ml8陽性對照1ml
4顯色液11/22ml9封板膜2/4 張
5說明書1 份10樣本稀釋液100ml
【需自備的設(shè)備及試劑】
1. 微量移液器：10µl-100µl 、100µl-1000µl。
2. 一次性移液器吸頭。
3. 量筒：500ml。
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4. 96 孔板酶標(biāo)儀。
5. 蒸餾水或去離子水。
6. 洗瓶或洗板機。
【樣品制備】
取動物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮， 無溶血。
【洗滌液的準(zhǔn)備】
濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，如有鹽結(jié)晶，搖 動使結(jié)晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作 10 倍 稀釋。稀釋好的洗滌液可在 4℃存放一周左右。
【注意事項】
1. 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，使用前應(yīng)搖 勻，使用后放回 2-8℃。
2. 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用， 使用試劑時應(yīng)防止試劑污染。
3. 底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性，使用時應(yīng) 該注意防護(hù)。
4. TMB（顯色液）不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。
5. 檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包 被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于 2-8℃)。
6. 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。
7. 嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得最好的結(jié)果。操作過程 中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確。
8. 抗原包被板為一次性用品，不得重復(fù)使用。
【操作步驟】
1. 每次試驗均設(shè)置陽性對照 1 孔、陰性對照 2 孔，陰 陽性對照不用稀釋，直接取 100ul 加入反應(yīng)孔。
2. 將待檢板條按 80ul/孔加入樣本稀釋液；
3. 將待檢血清按 20ul/孔加入孔內(nèi)并吹打混勻（移液 器槍頭請勿混用）；
4. 蓋上封板膜（可按實際需要自行裁剪），置 22 ( ± 3℃) 過夜反應(yīng)（16-18 小時）。
5. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃 度洗滌液每孔加250ul ，后甩去孔內(nèi)液體，以上步驟重 復(fù) 6 次，最后在干凈吸水紙上拍干。
6. 每孔加酶結(jié)合物 100µl ，蓋上封板膜置 22 (±3℃) 溫育 60 分鐘。
7. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃 度洗滌液每孔加250ul ，后甩去孔內(nèi)液體，以上步驟重 復(fù) 6 次，最后在干凈吸水紙上拍干。
8. 每孔加顯色液 100µl ，混勻、蓋上封板膜置 22 ( ± 3℃) 避光顯色 15 分鐘。
9. 每孔加終止液 50 μl ，使反應(yīng)終止，10 分鐘內(nèi)測定 結(jié)果。
【結(jié)果判定】
用酶標(biāo)儀于 450nm（630nm 作參比波長）讀取吸光 度 OD 值。
試驗成立的條件是：
陰性對照（N）OD 值>0.6、同時陽性對照(P)阻斷率>50%；
計算方法：
PI (阻斷率)= 1 －（樣品 OD 值÷陰性 OD 均值）x100%
陰陽性判斷： 牛、羊樣本
PI(阻斷率)>50%則判斷為陽性； PI≤50%則判斷為陰性。
【有效期】
貯存方法： 2 - 8oC 下貯存。 有效期： 12 個月。
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