氟喹諾酮類快速檢測試劑盒說明書 |
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氟喹諾酮類快速檢測試劑盒說明書 一、原理 試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的殘留物氟喹諾酮類藥物和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗氟喹諾酮類藥物抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留氟喹諾酮類藥物的含量成負相關，與標準曲線比較即可得出相應殘留物氟喹諾酮類藥物的含量。 二、試劑盒特性
恩諾沙星（ENR）檢測下限 ···················· 1ppb 環丙沙星（CIF） 檢測下限 ··················· 約1ppb 氧氟沙星（OFL） 檢測下限 ················ 約1ppb 達氟沙星（DAN）檢測下限 ················· 約1ppb 諾氟沙星（NOR）檢測下限 ··············· 約0.5 ppb 洛美沙星（LOM）檢測下限 ················ 約1ppb 培氟沙星 （PEF）檢測下限 ·············· 約0.5ppb 依諾沙星（ENO）檢測下限 ················· 約1ppb 奧索利酸（OXO）檢測下限 ················ 約1ppb 氟喹酸?。‵LU）檢測下限 ················· 約1ppb 麻保沙星（MAR）檢測下限 ················ 約1ppb 氨氟沙星（AMI）檢測下限 ················· 約1ppb 那氟沙星（NAD）檢測下限 ··············· 約2ppb
恩諾沙星（ENR） ·························· 100% 環丙沙星（CIF） ···························· 92.88% 氧氟沙星（OFL） ·························· 98.86% 奧索利酸（OXO） ··························· 116.86% 達氟沙星（DAN） ··························· 102.63% 諾氟沙星（NOR） ··························· 148.65% 洛美沙星（LOM） ·························· 86.24% 培氟沙星（PEF） ·························· 156.60% 依諾沙星（ENO） ··························· 98.97% 氟喹酸（FLU） ··························· 96.73% 麻保沙星（MAR） ·························· 110.63% 氨氟沙星（AMI） ··························· 98.86% 那氟沙星（NAD） ··························· 56.81%
組織 \雞蛋 ··································· 80±15% 血 清 ······································ 80±15% 蜂 蜜 ······································ 75±15% 三、試劑盒組成
四、所用儀器、試劑 具備的儀器：微孔酶標儀、打印機、均質器 、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g） 微量移液器：單道 20～200ul、單道100～1000ul、多道 250 ul 試 劑：濃鹽酸、二氯甲烷、正己烷、乙腈、肝素鈉、Na2HPO4·12H2O、NaH2PO4·2H2O 五、樣本前處理步驟
處理任何樣本時，都必須注意：
配液1 0.1M HCL溶液： 860µl濃鹽酸加去離子水100ml溶解。 配液2 乙腈-二氯甲烷混合溶液： V乙腈：V二氯甲烷 = 1 : 4 配液3 pH7.2 0.02M PB緩沖液： 5.16g Na2HPO4·12H2O + 0.87g NaH2PO4·2H2O 加去離子水1L溶解。 配液4 乙腈-二氯甲烷-0.1MHCl混合溶液 100ml乙腈-二氯甲烷(V乙腈：V二氯甲烷 = 4 :1） 混合溶液中加入5ml 0.1M HCl溶液。 配液5 用去離子水將2X濃縮復溶液按1：1稀釋 （1份濃縮復溶液+1份去離子水）用于樣本復溶。
1、稱2.0±0.05g 均質過的組織樣本于50ml離心管中； 2、加入乙腈-二氯甲烷混合溶液8ml，振蕩5min，4000r/min以上，15℃離心10min； 3、取4ml有機相至干燥容器中，56℃氮氣吹干/旋轉蒸發至干； 4、用1ml稀釋后的復溶液溶解干燥的殘留物，加入正己烷1ml混合30s，4000r/min以上，15℃離心5min； 5、去除上層取下層50µl液體用于分析。 樣本稀釋倍數：1 （b）血清樣本的處理
樣本稀釋倍數：2 （c）蜂蜜樣本處理方法：
樣本稀釋倍數: 2倍 六、 酶標免疫分析程序:
七、結果判定 結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含氟喹諾酮類藥物量成負相關。 1、粗略判定： 用樣本的平均吸光度值與標準品比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.238， 樣本2的吸光度值為0.946，標準液吸光度值分別是：0ppb為1.845； 1ppb為1.542；3ppb為1.130； 9ppb為0.635；27ppb為0.326； 81ppb為0.156。則樣本1的濃度范圍是27ppb - 81ppb；樣本2的濃度范圍是3ppb - 9ppb。乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中氟喹諾酮類藥物的實際濃度。 2、定量分析 （1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以DI一個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值 （2）標準曲線的繪制與計算 以標準品百分吸光率為縱坐標，以氟喹諾酮類標準品濃度（ng/ml）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中氟喹諾酮類藥物實際濃度。 若利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。（歡迎來dian索取） 八、 注意事項
九、儲藏條件和保質期
提示：酶標板真空包裝袋若有漏氣，酶標板仍然正常有效，不影響實驗結果，請放心使用。 |
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